3.3 间充质干细胞的培养及临床应用.pdf

间充质干细胞的培养及临床应用 山东省立医院 姜玉杰 间充质干细胞 （MESENCHYMAL STEM CELLS ） •间充质干细胞 （Mesenchymal stem cells，MSC）起源于中胚层，存 在于骨髓、脐带、脐血、脂肪、乳牙组织、胎盘等，具备干细胞的自我复 制和多向分化性，在发育的不同阶段和特定环境条件下，能分化为多种间 质起源的组织。 •人体骨髓中间充质干细胞含量相对较多，但仅占 0.001％～0.01％，难以 满足细胞治疗的需要，故需要在体外分离纯化，培养扩增才能满足要求 。 目前临床应用以 脐带间充质干细胞 为多见。 间充质干细胞的特点 •形态：在标准培养条件下呈贴壁生长 •细胞表型：表达 CD105, CD73和CD90，不表达 CD45, CD34, CD14 或CD11b, CD79a或CD19和HLA2DR; •分化功能。 4 间充质干细胞的来源 不同来源 MSC生物学特性比较 MSC来源 取材操作 细胞含量 增殖分化能力 免疫原性 伦理争议 骨髓 有创，痛苦 较低 较低，受年龄影响 较高 存在 脂肪 有创 较高 较强，受年龄影响 较高 存在 脐血 无创 极低 较强，无年龄影响 低 无 脐带组织 无创 丰富 较强，无年龄影响 低 无 骨髓MSC的分离 分离骨髓、脐带或脂肪组织的单个核细胞，经过培养获得贴壁细胞群，呈 梭形，体型较大，能分化为多种细胞。 其中富含间质干细胞、成纤维细胞、巨噬细胞、树突状细胞和内皮细胞。 还残留少量单个核细胞。对实验室操作人员要求较高。 脐带血来源 MSC的分离培养 将脐带洗涤以去除脐带表面的残血及污物，用无菌剪刀将脐带剪至小的 肉糜样组织块； 取剪碎的组织块加入到 150cm2培养瓶中，每瓶加入 25-30ml预热的完 全培养基进行培养； 小心将培养瓶放入 37℃ 5%CO2培养箱中； 培养最初 7天，保持培养瓶静止。 7天后观察细胞贴壁情况，按细胞换液 操作规程换液，以后每隔两天一次。待细胞生长至 60%-80%汇合时，按 细胞传代标准操作流程传代。 流式细胞术鉴定 10 脐带间充质干细胞 1.来源丰富、采集简便 2.数量丰富、增殖力强，可多次使用 3.基因稳定、不易=(?C'?9?2?2? 4.免疫原性低，具有免疫调节功能 5.很强的促造血功能 6.广泛的临床应用范围 脐带间充质干细胞图片 MSC临床治疗机制 替代和修复死亡和受损伤的细胞 激活休眠和处于抑制状态的细胞 旁分泌作用（分泌趋化因子、神经营养因子、抗凋亡因子等） 免疫调控机制（诱导免疫耐受和免疫调节） 促进细胞间电能力、电传导的恢复（分泌连接蛋白帮助细胞间连接、促 进离子通道的开放等） 间充质干细胞